• 3D单分子荧光成像系统-SAFe 360

    3D单分子荧光成像系统-SAFe 360


    SAFe 360是法国abbelight公司推出的一款基于单分子定位的显微成像(SMLM)的新型3D单分子成像系统,它独有的DAISY技术整合了散光技术和超临界角光技术,能够极大提高定位精度,xyz三轴定位精度高达15nm,可以提供高清晰三维亚细胞结构图像,支持同时四色成像,可以用于细胞纳米三维成像,观测高清晰亚细胞器结构,实时研究不同的结构功能蛋白的共定位信息,在单分子水平研究分子动力学反应以及细胞间的相互作用等。


    加装
    TIRF
    PALM
    STORM
    SPT

    smFRET

    ...... 


    兼容
    Confocal
    Spinning-Desk
    Widefield
    SIM

    STED

    ......


    设备参数


    + 成像模式:PALM、STORM、PAINT、smFRET 、SPT

    + 光源模式:Epi、TIRF、HILO

    + 最高分辨率:15 nm的XYZ轴分辨率

    + 超大视野:200 × 200 μm2的视野

    +  一次可同时采集1.2 μm深度图像信息

    +  最高图像深度:10 μm

    +  实时漂移矫正

    +  最高四色同时成像

    +  活细胞成像模式


    配套试剂


    Smart kit


    ?  10 doses per box

    ?  200 μL per dose

    ?  30 sec prepartion

    ?  2 months in a fridge

    ?  2 weeks on sample



    Compatible dyes


    ?  Atto 488, WGA-AF?488

    ?  AF?532, CF?532, Cy3b

    ?  AF?555, AF?594, CF?555, AF?568, CF?568, Cy5, MemBriteTM 568, TMR

    ?  AF?647, CF?647, AF?680, CF?680, MemBriteTM 640, Actin-stain 670, SiR647



    ■  研究细胞质膜上的内陷结构与功能


    真核细胞的细胞质膜是一个不均一体系,包含大量脂类组成和生物物理特性不同的区域。这些蛋白脂类区域使质膜产生内陷,而内陷在胞吞过程中起重要作用。在这些质膜区域中,网格蛋白包被的小窝(clathin coated pits, CCP)和胞膜窖(caveolae)由于表面有明显的蛋白包被,很容易用电镜成像等方法观测到。CCP呈80-120 nm的球形结构,包被有网格蛋白和衔接蛋白。网格蛋白调控的内吞作用通路(CME)通过被膜小窝实现胞吞。Caveolae是50-80 nm的内陷结构,在信号转导,膜运输,胆固醇运输,机械传感等过程中起作用,在受到机械应力作用的细胞,如脂肪细胞,内皮细胞和肌细胞中含量较高。有研究发现了小凹的产生及与胞内体的融合,但Caveolae是否在胞吞中起作用尚无定论。

    在下图的实例中,研究人员使用了Abbelight的成像3D单分子荧光成像系统-SAFe 360分辨出了内皮细胞中的Clathrin和Caveolae。结果显示了清晰、无重叠的荧光分布,与电镜成像结果一致。

    图1. Abbelight SAFe360系统重现质膜上蛋白脂类区域的蛋白分布


    图2. 通过SAFe360的同时多色成像功能可以清晰、无重叠地区分Clathrin 和Caveolae,进一步研究Clathrin 和Caveolae的内吞作用通路的相互关系。



    ■  研究大肠杆菌RNA聚合酶的空间分布与动力学


    大肠杆菌中的RNA聚合酶(RNAP)空间上呈拟核形状分布,是核糖体RNA(rRNA)的转录中心。下方实例使用Abbelight SAFe 360系统通过PALM超分辨成像与单分子追踪(sptPALM)解析大肠杆菌RNAP的纳米尺度空间分布与动力学,进而研究转录调控机制。


    图1. (A)Denndra2标记RNAP在大肠杆菌中分布定位(定位精度约为15 nm);(B)通过DBSCAN算法对大肠杆菌中RNA聚合酶分布进行团簇分析。


      

    图2. 在活细胞中以200 FPS(5 ms/帧)的采集速度对大肠杆菌中Dendra2标记的RNAP分子进行单分子追踪以研究单个RNAP分子运动轨迹,按照运动状态分为静态(红色,即转录中)或动态(紫色,扩散运动)。

     


    3D线粒体结构


    核孔复合物


    老鼠海马神经元


    微管蛋白网络




    [1] Radhakrishnan, A. V., et al. "Single-Protein Tracking to Study Protein Interactions During Integrin-Based Migration." The Integrin Interactome. Humana, New York, NY, (2021). 85-113.

    [2] Jouchet, Pierre, et al. "Nanometric axial localization of single fluorescent molecules with modulated excitation." Nature Photonics (2021): 1-8.

    [3] Pernier, Julien, et al. "Myosin 1b flattens and prunes branched actin filaments." Journal of cell science 133.18 (2020).

    [4] Jimenez, Angélique, Karoline Friedl, and Christophe Leterrier. "About samples, giving examples: optimized single molecule localization microscopy." Methods 174 (2020): 100-114.

    [5] Mau, Adrien, et al. "Fast scanned widefield scheme provides tunable and uniform illumination for optimized SMLM on large fields of view." bioRxiv (2020).

    [6] Orre, Thomas, et al. "Molecular motion and tridimensional nanoscale localization of kindlin control integrin activation in focal adhesions." bioRxiv (2020).

    [7] Cabriel, Clément, et al. "Combining 3D single molecule localization strategies for reproducible bioimaging." Nature communications 10.1 (2019): 1980.

    [8] Woodhams, Stephen G., et al. "Cell type–specific super-resolution imaging reveals an increase in calcium-permeable AMPA receptors at spinal peptidergic terminals as an anatomical correlate of inflammatory pain." Pain 160.11 (2019): 2641-2650.

    [9] Belkahla, Hanen, et al. "Carbon dots, a powerful non-toxic support for bioimaging by fluorescence nanoscopy and eradication of bacteria by photothermia." Nanoscale Advances (2019).

    [10] Denis, Kevin, et al. "Targeting Type IV pili as an antivirulence strategy against invasive meningococcal disease." Nature microbiology 4.6 (2019): 972.

    [11] Szabo, Quentin, et al. "TADs are 3D structural units of higher-order chromosome organization in Drosophila." Science advances 4.2 (2018): eaar8082. 

    [12] Boudjemaa, Rym, et al. "Impact of bacterial membrane fatty acid composition on the failure of daptomycin to kill Staphylococcus aureus." Antimicrobial agents and chemotherapy 62.7 (2018): e00023-18.

    [13] Culley, Sian, et al. "Quantitative mapping and minimization of super-resolution optical imaging artifacts." Nature methods 15.4 (2018): 263.

    [14] Berger, Stephen L., et al. "Localized myosin II activity regulates assembly and plasticity of the axon initial segment." Neuron 97.3 (2018): 555-570.

    [15] Cabriel, Clément, et al. "Aberration-accounting calibration for 3D single-molecule localization microscopy." Optics letters 43.2 (2018): 174-177. 

    [16] Bouissou, Ana?s, et al. "Podosome force generation machinery: a local balance between protrusion at the core and traction at the ring." ACS nano 11.4 (2017): 4028-4040. 

    [17] Sellés, Julien, et al. "Nuclear pore complex plasticity during developmental process as revealed by super-resolution microscopy." Scientific reports 7.1 (2017): 14732.

    [18] Bourg, Nicolas, et al. "Direct optical nanoscopy with axially localized detection." Nature Photonics 9.9 (2015): 587. 













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